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淺析植物組織培養過程中的汙染問題及解決辦法
文章出處: 作者:hanguang 人氣:0 發表時間:2017-10-10


植物組織培養指通過無菌無菌操作把植物體的外植體接種於人工配製的培養基,在人工控製的環境條件下去進行離體培養的一套技術和方法。植物組織培養過程中的溫度、濕度、營養及培養基的PH等正是微生物生長的最佳條件,因此與褐化、玻璃化相比,汙染更易發生,給科研及生產均帶來很大危害,分析和防控汙染在組織培養中是不容忽視的。 

一、汙染種類 

從汙染產生的病原來看,主要包括真菌和細菌。 

細菌汙染的特點為在培養基表麵或材料表麵出現黏液莊物體、菌落或者是渾濁的水跡狀,有時甚至出現泡沫發酵狀,一般在接種1-2天即能發現,主要為大腸杆菌、鏈球菌、芽孢杆菌,主要是由於使用未消毒好的工具及操作者呼吸排出的細菌引起或操作者的手接觸材料或器皿邊緣所致。 

真菌汙染的特點是菌斑呈絨毛狀、絮狀,界限不明顯,伴有不同顏色的孢子,一般在接種3-10天後才能發現,主要為黴菌汙染,一般是由空氣汙染和瓶口邊緣以及取放封口楊起的灰塵和真菌孢子落入器皿中造成的。 

二、汙染來源及防控措施 

一般來說,植物組織培養中汙染來源主要有三類:外植體帶菌,接種汙染,培養過程汙染 外植體為組織培養的材料,外植體表麵和內部常攜帶一些微生物,是植物組織培養過程的主要汙染源,為了減少外植體導致的汙染,應選取合適的材料,盡可能選擇帶菌少以及不攜帶內生菌的外植體。1、選取胚和無病害的莖尖等,減少攜帶內生菌的幾率。2、不同季節,外植體帶菌情況不同,選擇合適季節采集外植體。3、將有土栽培改為無土栽培,減少植物攜帶外生菌的幾率。4、將室外的植株移到清潔的室內栽培,生長一段時間後,再取外植體。5、利用種子在無菌條件下培育成無菌苗,然後再將無菌苗的胚軸、培根、子葉等作為外植體。6、采用合適消毒方法,對於大多數外植體隻需表麵消毒即可,但由於某些外植體有內生菌,為達到較好的滅菌效果,還需進行其他處理。 

接種時,由於鑷子帶菌或接種室及操作人員的未消毒幹淨也易引起汙染。每次接種前,用紫外燈照射接種室、緩衝間、超淨工作台20min,關閉紫外燈後,應提前打開超淨工作台風機15min再進行接種,另外應定期檢查超淨工作台濾布,操作人員應時常注意個人衛生,勤梳洗,勤剪指甲,接種時先用肥皂洗手,並用新潔爾滅溶液浸泡5min,接種過程中,操作人員應及時用75%酒精擦拭雙手和超淨工作台麵。接種器械應及時在酒精燈火焰上進行灼燒滅菌,接種過程中應盡量少說話、咳嗽,超淨工作台麵上應保持氣流暢通,使操作區空氣不斷淨化。當打開培養基瓶接種時,培養瓶應拿成斜角,以避免灰塵進入瓶中。 

培養室是培養物生長的室內環境。若培養室門窗封閉不嚴,易給蒼蠅、飛蛾等的進入創造條件,有利於雜菌傳播,同時室內塵埃多,若不經常清潔消毒,將會使細菌增多,因此要對培養室進行定期熏蒸(甲醛:高錳酸鉀=2:1),同時應用甲醛溶液噴洗牆麵,每周用75%的乙醇溶液作噴霧處理,用0.5%的新潔爾滅溶液擦洗培養架和地板,另外要及時處理培養室中的汙染菌和汙染苗。 

三、結束語 

組織培養中汙染的發生時極其普遍的,嚴重影響組培苗的工廠化進程,給科研也帶來極大損失。因此對組培中汙染原因及防控的研究都是極其重要的。


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