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無菌操作技術
文章出處: 作者:hanguang 人氣:0 發表時間:2017-10-10


植物組織培養要求嚴格的無菌條件及無菌操作技術。無菌操作技術如下: 

一、接種室的無菌技術 

無菌操作室或接種室除用甲醛和高錳酸鉀按21的比例定期熏蒸滅菌,在實驗室用甲醛和 高錳酸鉀封閉消毒器具,不宜進入消毒空間。消毒後通風換氣,等氣味散盡後再出入。使用前用20%新潔爾滅(苯紮溴銨溶液)對接種室內牆壁、地板及設備擦洗,用70%酒精噴霧(使灰塵迅速沉澱),用紫外線滅菌20分鍾或更長,照射期間接種室門要關嚴。當接種室紫外線消毒期間,工作人員不要處於正消毒的空間內,更不要用眼睛注視紫外燈,也要避免長時間在開著紫外燈的超淨工作台內進行操作。一般在接種室用紫外線消毒後,不要立即進入接種室,此時室內充滿高濃度的臭氧,會對人體,尤其是呼吸係統造成傷害。應在關閉紫外線燈15-20分鍾後再進入室內。 

二、工作人員的無菌技術 

工作人員要經常洗頭、洗澡、剪指甲,保持個人清潔衛生。在接種室穿醫護用的特製工作衣帽。工作衣、帽、口罩也要經常清洗,洗淨晾幹後用紙包好進行高溫高壓消毒。工作衣使用前後掛於預備間,並用紫外線照射滅菌。接種前洗手,最好用肥皂水或新潔爾滅、洗手液等清洗,然後用酒精擦洗或噴灑。 

三、接種器械無菌技術 

接種時首先要用紫外線照射超淨工作台麵後,用70%酒精噴霧或擦洗工作台麵。工作前送風15-30分鍾左右。首先對器械支架進行灼燒消毒,然後對接種工具如手術剪、手術刀、鑷子等進行灼燒消毒,方法一般是用70%酒精浸漬、擦拭或噴灑後再酒精燈上灼燒。接種工具灼燒後放在器械支架上冷卻待用。接種一定數量材料後,接種器械要重新灼燒滅菌,避免因沾有植物材料或瓊脂等引起雙重汙染和交叉汙染。通常采用兩套接種工具,使用一套時,另一套灼燒後冷卻。對於較大的器械如顯微鏡等,可用70%酒精擦洗表麵,然後用紫外線照射滅菌。繼代轉接時,要注意對待轉接的培養物進行仔細觀察挑選,防止將已經汙染的培養物繼代擴增;放置了很久的試管或三角瓶表麵和瓶塞宜用70%酒精棉擦洗。接種器械灼燒時應遠離裝酒精的容器,更不能剛剛燒完就插入裝酒精的容器中,也要避免不小心將酒精容器或酒精燈碰倒後引起失火。另外,在酒精燈點燃後,不宜用酒精溶液噴灑超淨工作台。 

四、接種操作無菌技術 

接種時,要穿好工作衣,戴好工作帽和口罩,不準說話或對著植物材料或培養容器口呼吸。打開包塞紙和瓶塞、瓶蓋時注意不要汙染瓶口。在近酒精燈火焰處打開培養瓶瓶口,並使培養瓶傾斜,以免微生物落入瓶內。瓶口可以在拔塞、開蓋前灼燒滅菌,接種工作宜在近火焰處進行。手不能接觸接種器械的前半部分(即直接切割、觸碰植物材料的部分),接種操作時(包括擰開或擰上培養瓶蓋時),培養瓶、試管或三角瓶宜水平放置或傾斜一定角度(45度以下),避免直立放置而增大汙染機會。手和手臂應避免在培養基、植物材料、接種器械上方經過。已消毒的植物材料接種時不慎掉在超淨工作台上,不宜再用。接種期間如遇停電等事件使超淨工作台停止運轉,重新啟動時應對接種器械及暴露的植物材料重新消毒。 


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